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吉瑪服務

吉瑪全程服務

用戶提供整體實驗方案,吉瑪通過評估客戶需求,圍繞公司特色,結合現有平臺及擴展平臺,利用分子細胞生物學技術,提供真實實驗數據,完成客戶外包試驗。

產品描述
實驗數據
使用方法
應用實例
訂購須知

用戶提供整體實驗方案,吉瑪通過評估客戶需求,圍繞公司特色,結合現有平臺及擴展平臺,利用分子細胞生物學技術,提供真實試驗數據



1、 篩選有效的干擾片段或病毒


 1.1 摸索細胞最佳轉染或侵染條件 熒光蛋白指示轉染效率(一般達70%以上)
 1.2 RT-PCR
 1.2.1 RNA提取質量檢測電泳圖
 1.2.2 RT-PCR擴增曲線示例(三重復避免系統誤差)
 1.2.3 RT-PCR數據分析示例(計算組內誤差)
 1.2.4 RT-PCR結果柱狀圖示例(檢測干擾效率)
 1.2.5 靶基因與內參溶解曲線圖(檢測擴增質量)
 1.2.6 DNA片段擴增質量檢測電泳圖
 1.3 Western Blot
 1.3.1 蛋白電泳圖
 1.3.2 灰度分析圖

 2、 雙熒光素酶系統檢測siRNA,microRNA有效性

 2.1 載體信息及工作原理(基于Promega系統),si/miRNA靶基因預測雙熒光素酶報告系統:吉瑪采用promega的psicheck2.0載體(或pmirGro載體)系統構建靶基因3‘UTR系統。該系統可檢測siRNA/miRNA與靶基因的調控關系,報告熒光(psicheck2.0載體的hRluc或pmirGro載體的hluc)驗證si/miRNA調控作用,校正熒光(psicheck2.0載體的hluc或pmirGro載體的hRluc)檢測質粒表達效率。另外客戶還可選擇構建突變UTR系統。具體價格敬請來電咨詢。

 2.2 載體設計及結果。

3、 進行下游細胞實驗
 
3.1 下游靶基因表達量的鑒定
 
常規出示的結果同樣包括:RT-PCR、Western,如果涉及分泌蛋白,可以進行Elisa實驗,客戶可指定檢測方法
 
3.2 穩定株篩選實驗
 
在藥物壓力下篩選穩定表達細胞株,常規出示結果包括:RT-PCR、Western,客戶可指定篩選及檢測方法。 實驗過程:1.抗生素篩選濃度確定(致死曲線):2. 細胞接種:轉染實驗前天接種細胞。轉染時細胞密度達到60%~80%;3. 細胞轉染(脂質體)或侵染(慢病毒)4. 利用質粒抗性篩選穩定干擾細胞株;5. 目的基因干擾效果驗證。 周期2-3個月,提供T25穩篩細胞株一瓶,具體價格敬請來電咨詢。
 
3.3 克隆形成率實驗
 
采用結晶紫或吉姆薩染色法,檢測轉入靶基因后細胞增殖情況,常規出示結果包括:克隆染色圖及柱狀分析圖
 
3.4 細胞增殖實驗
 
采用CCK8或MTT方法,檢測細胞增殖的情況,使用CCK-8方法: 據活細胞線粒體內的脫氫酶可將試劑中的有效成分轉變為有顏色的Formazan,并可被酶標儀檢測,間接反應活細胞數量。具體價格敬請來電咨詢。(包括4組細胞,每個樣品3-5個復孔,客戶可以選擇檢測時間點。)
 
常規出示結果包括:
 
3.4.1原始讀數(每個樣品5個重復)
 
3.4.2細胞增殖曲線圖
 
3.5細胞周期實驗
 
采用PI染色的方法,在流式細胞儀上對細胞樣品進行細胞周期分析
 
3.6 細胞凋亡的分析
 
采用Annexin V / PI ;Annexin V-PE /7-AAD或客戶自己提供合適的試劑盒,在流式細胞儀上對細胞樣品進行細胞。

3.7 細胞遷移實驗(Transwell)
 
采用結晶紫或DAPI染色法,檢測細胞遷移的能力。或用劃痕進行檢測。客戶需提供:檢測細胞及其培養條件和處理方法。選擇觀察時間點。

3.8 細胞侵襲實驗(Transwell+ Matrigel Basement Membrane Matrix)
 
采用結晶紫或DAPI染色法,檢測細胞侵襲的能力,鋪有Matrigel的特殊濾膜,正常細胞不能自由穿過。在下室中加入趨化劑,上室加有經過處理的重懸腫瘤細胞,具有侵襲能力的腫瘤細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動,并粘附在濾膜下表面。具體價格敬請來電咨詢。
 
3.9 細胞劃痕實驗
 
通過對劃痕部位距離差異的計算,檢測細胞遷移能力
 
3.10 Confocol實驗:
 
通過融合熒光蛋白或熒光二抗,鑒定目標蛋白細胞內定位,利用抗原-抗體特異性結合的原理,用經熒光染料標記的抗體對細胞內的蛋白質進行定性或定量研究的方法。流程:細胞爬片 轉染或藥物處理 固定透化 封閉 一抗孵育 熒光二抗孵育 熒光顯微鏡觀察拍照。客戶需要提供熒光一抗及二抗,具體價格敬請來電咨詢。

3.11 粘附實驗部分:

本平臺是借助CCK8試劑盒可以檢測活細胞的功能,檢測不同處理組間的粘附差異。

3.12 酶聯吸附實驗(ELISA) 4步驟幫您輕松檢驗各種蛋白大分子抗原:

(1)將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。(2)加受檢標本,保溫反應,去除未結合物質。(3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫標抗體結合。(4)加底物顯色。服務價格:檢測3-5組樣品,每組樣品3個復孔,具體價格敬請來電咨詢。

服務收費標準
目錄號 產品名稱 價格 交貨期限
H02001 RNAi設計服務 詢價 2個工作日
H02002 RNAi相關試劑的合成服務 詢價 1周
H02003 RNAi轉染優化服務 詢價 1周
H02004 RNAi干擾效果檢測服務 詢價 2周
H02005 RNAi穩定細胞株的篩選 詢價 2個月
H03001 流式細胞技術檢測服務 詢價 1周
H04001 細胞周期檢測服務 詢價 1周
H04002 細胞凋亡檢測服務 詢價 1周
H04003 細胞活性測定服務 詢價 2周
H04004 細胞基質黏附實驗服務 詢價 1-2周
H04005 細胞侵襲實驗服務 詢價 1-2
H04006 細胞免疫熒光實驗 詢價 1-2周
H04007 細胞免疫吸附實驗 詢價 1-2周




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