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吉瑪產品

shRNA慢病毒載體

慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,

產品描述
實驗數據
使用方法
應用實例
訂購須知

慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進入到宿主細胞之后,經過反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。


載體的技術特點

1、大大提高對于一些較難轉染的細胞, 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等轉導效率
2、快速獲得高水平的表達
3、目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加
4、將免疫反應降到最低
5、能夠插入大的片段(~7.5 kb)
6、能夠應用于干細胞研究
7、最低的細胞毒性



慢病毒表達系統

本公司使用的慢病毒表達系統,它由三部分組成:慢病毒表達載體、慢病毒包裝質粒、可產生假病毒顆粒的細胞系


慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進入到宿主細胞之后,經過反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。


慢病毒介導的 siRNA活體實驗用病毒液服務流程

對于活體 RNAi實驗模型,吉瑪公司可以為您生產高質量的病毒液,服務流程如下:

根據目的基因相關信息(序列,序列號等),利用高效的設計軟件,設計 siRNA序列,針對每條目的基因,我們設計4條siRNA序列,其中1條序列為陰性對照組;

根據設計好的 siRNA序列,設計,合成兩條互補的短片段的DNA;

對合成好的 DNA片段進行稀釋,退火,連接到線形化處理過的載體,轉化,涂平板,過夜培養;

通過 PCR的方法篩選陽性菌落,進行測序,分析測序結果;

對于測序正確的重組質粒,提取和純化高質量的不含內毒素的 siRNA病毒穿梭質粒;

利用構建好的質粒做轉染實驗, 48小時后通過實時熒光定量和Western的方法分析目的基因,篩選出一條最有效的siRNA序列;

篩選出的高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染 293T細胞,進行病毒包裝和生產,收集病毒液;

濃縮、純化病毒液,測定滴度;

提供高質量的病毒液給客戶(對于活體實驗,我們建議的病毒基本單位為 1×10^9TU/ml ,對于小鼠尾靜脈給藥建議50~100ul/只)


Lentiviral shRNA的基因沉默效率



Lentiviral shRNA 抑制生長導管形成



Lentiviral shRNA 引起的表型變化



即用型Lentivirus shRNA構建包裝服務

Lentivirus shRNA服務特點:

1、適用于原代培養細胞,難以轉染的各種細胞

2、可用于制備多種穩定沉默特定基因的細胞株

3、您通過GenePharma SupersilencingTM Vector方法篩選到有效的的基因沉默靶點,如果您需要構建慢病毒載體來滿足實驗需求



Lentivirus shRNA載體

GenePharma Supersilencing Vector 干擾載體 
包裝載體:Helper vector-I
Helper vector-II
Helper vector-III
提高包裝效率和對特定細胞的感染力,提高生物安全性



品質保證

客戶自己提供的序列委托我們制備的病毒顆粒,我們確保制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性,確保病毒顆粒的總數和病毒顆粒的滴度達到合同規定的要求。

siRNA高效表達慢病毒載體構建

1. 通過專業設計人員的精心篩選獲得欲篩選的siRNA序列。

2. 設計siRNA 正義、反義鏈,選擇相應loop結構,加上酶切位點的目的序列。

3. 合成相應的DNA序列,然后克隆于相應的慢病毒表達載體。

4. 將載體轉化到宿主菌中進行克隆、篩選,得到質粒重組體即siRNA表達載體。

5. siRNA表達載體在真核細胞中可產生siRNA,從而在細胞內產生特定基因的沉默效果。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進行長期基因沉默研究的方法。

本公司為您提供siRNA高效表達慢病毒載體構建服務。構建好的siRNA表達載體,可直接用于轉染細胞進行RNA干擾操作。


服務要求 

1. 通過E-mail發送訂單,告知選定的相應的基因信息,待構建的靶點信息。靶基因在NCBI數據庫中的Gene ID、Accession No.

2. 我們可為您免費設計siRNA序列.

訂購流程

1. 請用E-mail或者電話聯系吉瑪公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-51320195。

2. 根據客戶提供的基因信息設計siRNA序列,并由客戶確認。 

3. 根據客戶提供的siRNA序列信息或經客戶確認的siRNA序列信息設計引物。 

4. 根據所選擇的慢病毒載體構建相應的siRNA表達載體。 

5. 在完成相應的試驗后,我們將為您提供一套完整的實驗結果,其中包括:實驗操作說明、電子版的測序結果及彩圖、構建好的siRNA慢病毒表達載體質粒及其甘油菌等。 


目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C06001

慢病毒干擾載體LV-1 (pGLVU6/GFP)

50μg

¥1,000

2周

C06002

慢病毒干擾載體LV-2 (pGLVU6/Puro)

50μg

¥1,000

2周

C06003

慢病毒干擾載體LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro)

50μg

¥1,000

2周

C06004

慢病毒干擾載體LV-9 (pGLVU6/RFP)

50μg

¥1,000

2周

C06005

慢病毒干擾載體LV-10 (pGLVU6/RFP/Puro)

50μg

¥1,000

2周











病毒包裝及滴度測定

根據客戶的需要克隆目的片段或shRNA序列到所需要的慢病毒載體,然后進行細胞轉染及病毒生產。

產品提供形式

1 構建好的慢病毒載體第一次包裝與純化,滴度至少為1×10^8TU/ml。

2 包裝與純化后的病毒載體續包裝,每次包裝滴度至少為1×10^8TU/ml。

3 如果需要大量病毒液用于動物實驗,我們可提供滴度達10^10 TU/ml以上高度純化的病毒液。

4 現有的GAPDH陽性對照病毒液,每支包裝滴度至少為1×10^8TU/ml。


目錄號 產品名稱 規格 價格 交貨期限
D01001 客戶定制序列的慢病毒顆粒(提供免費設計) 一個基因一個序列 (1ml,10*8 TU/ml) ¥2,880 3周
D01002 客戶定制序列的慢病毒顆粒(提供免費設計) 一個基因一個序列 (1ml,10*9 TU/ml) ¥3,880 3周
D02001 shRNA慢病毒超值套餐 (一個基因設計4個序列,一個陰性對照,各1ml,10*8 TU/ml) 1 套 ¥9,800 4周
D02002 shRNA慢病毒超值套餐 (一個基因設計4個序列,一個陰性對照,各1ml,10*9 TU/ml)) 1 套 ¥13,000 4周
D03001 慢病毒陰性對照(10*8 TU/ml) 200 ul ¥500 6個工作日
D03002 慢病毒陰性對照(10*8 TU/ml) 600 ul ¥1,200 6個工作日
D03003 慢病毒陰性對照(10*8 TU/ml) 1 ml ¥1,800 6個工作日
D03004 慢病毒陰性對照(10*9 TU/ml) 200 ul ¥1,000 6個工作日
D03005 慢病毒陰性對照(10*9 TU/ml) 600 ul ¥2,000 6個工作日
D03006 慢病毒陰性對照(10*9 TU/ml) 1 ml ¥3,000 6個工作日
D04001 篩選有效干擾慢病毒 1×10^8 TU/ml 詢價 50-70個工作日
D04002 篩選有效干擾慢病毒 1×10^9 TU/ml 詢價 50-70個工作日

備注:慢病毒需要干冰件運輸,除江浙滬外所有地區,需要加收¥300 運費。
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