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吉瑪產品

miRNA質粒載體

MicroRNA(miRNA)是一類真核生物內源性的小分子單鏈RNA,通常長為18~25nt,能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結合,引起靶序列降解或抑制其翻譯,從而對基因進行轉錄后的表達調控。

產品描述
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應用實例
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MicroRNA 表達載體構建

MicroRNA(miRNA)是一類真核生物內源性的小分子單鏈RNA,通常長為18~25nt,能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結合,引起靶序列降解或抑制其翻譯,從而對基因進行轉錄后的表達調控(如右圖所示)。GenePharma MicroRNA載體利用CMV啟動子可以在眾多哺乳動物細胞中快速、高效、持續表達pre-miRNA,經過Drosha(RNaseⅢ)作用形成small hairpin pre-miRNAs(約70nt),再過Dicer作用形成成熟的microRNA(約22nt),作用靶mRNA,起到表達調控作用。

microRNA過表達載體

吉瑪提供兩種過表達的方式:

1. 從天然的基因組序列中表達pre-miRNA轉錄本構建pre-microRNA。插入序列不僅包含pre-miRNA莖環結構,同時構建100-200bp長的上下游兩端的側翼序列。使用使用pol-Ⅱ(如CMV)啟動子,這種構建方式保證高水平的表達pre-microRNA。表達出來的pre-miRNA的生理活動盡可能接近天然狀態。



使用這種構建方式,客戶只需提供miRNA的具體信息及指定過表達載體類型(如吉瑪pEX系列 M核過表達載體?,我們完成序列合成,質粒構建。




目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C09001

質粒型microRNA 過表達載體-1

(pre-miRNA+flanking sequences, ~500bp)

50μg

¥2,500

3-4周


2. 利用吉瑪優化過的載體,模擬內源miRNA-155的表達模塊,這種構建方法解決了不同miRNA表達效率差異的問題,同時也有效的避免了有些內源miRNA表達時產生-3p,-5p的問題。miRNA的發夾序列融合在EGFP報告基因的后面,模擬miRNA在體內的成熟過程。






GenePharma microRNA載體元件信息及用途

特征

用途

CMV promoter

高表達目的基因

EmGFP

利用熒光顯微鏡觀察轉染效果

Blasticidin resistance gene

可用來篩選穩定細胞系

Spectinomycin

篩選含有已經轉化質粒的E. coli

pUC origin

質粒可以在E. coli中進行高拷貝



使用這種構建方式,客戶只需提供miRNA的具體信息,我們完成序列合成,質粒構建。




目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C09002

質粒型microRNA 過表達載體-2

(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)

50μg

¥1,000

2-3周


備注:保證插入序列正確,不保證miRNA的過表達效率,不保證轉染效率。所有實驗僅供科研使用。

microRNA抑制子表達載體


吉瑪提供兩種miRNA抑制子載體構建的方式:


1. ;)PAN>利用吉瑪優化過的載體,模擬內源miRNA-155的表達模塊,來表達miRNA inhibitor序列。這種構建與吉瑪miRNA過表達方式2使用同樣的載體系統,方便客戶使用同一套系統完成miRNA的過表達與抑制。
使用這種構建方式,客戶只需提供miRNA的具體信息,我們完成序列合成,質粒構建。





目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C09003

質粒型microRNA 抑制子載體-1

(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)

50μg

¥1,000

2-3周


2. miRNA sponge(海綿)載體構建:吉瑪通過構建載體,表達包含多個成熟miRNA結合位點的RNA序列,通過吸附結合成熟miRNA,從而抑制miRNA的作用,從而進行功能缺失性研究。



miRNA sponge的特點:

a. 由于miR Sponges是由質粒編碼的,它能夠通過真核表達載體達到穩定沉默細胞microRNA的目的;
b. 能夠沉默整個家族的microRNA以達到對整個家族microRNA功能的研究;
c. 可以利用miR Sponges實現體內外loss of function研究;
d. 可以用來檢測luciferase靶基因報告系統分析;
e. 可以自由組合串聯不同miRNA抑制子序列,達到沉默多種不同miRNA的目的。
使用這種構建方式,客戶需提供miRNA的具體信息、預構建miRNA inhibitor的重復數及預構建inhibitor的序列信息,我們完成序列合成,質粒構建。


目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C09004

質粒型microRNA 抑制子載體-2

(microRNA inhibitor sponge, 3重復)

50μg

¥1,500

3周


microRNA靶基因熒光素酶報告載體

吉瑪采用Promega的psicheck2.0的載體系統完成靶基因3’ UTR質粒載體構建服務。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR構建。

psicheck2.0報告基因檢測系統用來檢測siRNA/miRNA與靶基因是否可能存在調控作用,該報告系統報告熒光(hRluc),其下游構建了靶基因3’UTR區域,通過對該熒光的監測,即可驗證siRNA/miRNA對該靶標是否有調控作用;另有一校正熒光(hluc) 作為穩定內參,用于監測質粒表達效率。

嚴格的實驗體系,要求miRNA與mRNA 3’ UTR驗證實驗中需要構建靶mRNA的點突變載體,以驗證靶點作用有效性。突變載體構建主要依據預測的miRNA與靶基因3’UTR的穩定結合區域(即種子區)。通過種子區全部堿基或部分堿基突變導致miRNA與靶基因3’UTR區域的結合能力大大降低,從而判斷是否存在miRNA的調控作用。

完成miRNA靶基因報告基因載體構建,需要客戶提供:miRNA具體信息,預測靶基因信息,miRNA與靶mRNA結合位點信息。

目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C08005

雙熒光素酶報告實驗載體構建(≤500bp)a

50μg

¥2,500

3-4周

C08006

雙熒光素酶報告實驗突變載體構建(種子區突變)b

50μg

¥2,500

3-4周


注:
a. 靶基因3’ UTR長度須小于500bp,否則價格及合成周期另計;
b. 單位點(即1個miRNA-mRNA作用位點) 突變價格如上,多位點突變價格及合成周期另計。
Lentivirus microRNA表達載體



目錄號

產品名稱

規格

價格

交貨期限

C06001

慢病毒干擾載體 LV-1 (pGLVU6/GFP)

50μg

詢價

2周

C06002

慢病毒干擾載體 LV-2 (pGLVU6/Puro)

50μg

詢價

2周

C06003

慢病毒干擾載體 LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro)

50μg

詢價

2周

C06004

慢病毒干擾載體 LV-9 (pGLVU6/RFP)

50μg

詢價

2周


GenePharma microRNA 過表達載體庫

吉瑪公司已經利用自己的miRNA載體骨架成功構建為數眾多的miRNA的過表達載體,載體庫中的miRNA expression vectors 1周之內即可出貨,價格更優。




Name Accession Species Seqence
hsa-miR-155 MIMAT0000646 Homo sapiens UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU
hsa-miR-106b MIMAT0000680 Homo sapiens UAAAGUGCUGACAGUGCAGAU
hsa-let-7a MIMAT0000062 Homo sapiens UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU
hsa-miR-15a MIMAT0000068 Homo sapiens UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG
hsa-miR-16 MIMAT0000069 Homo sapiens UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG
hsa-miR-17 MIMAT0000070 Homo sapiens CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG
hsa-miR-143 MIMAT0000435 Homo sapiens UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC
hsa-miR-145 MIMAT0000437 Homo sapiens GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU
hsa-miR-125b MIMAT0000423 Homo sapiens UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA
hsa-miR-218 MIMAT0000275 Homo sapiens UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU
hsa-miR-451 MIMAT0001631 Homo sapiens AAACCGUUACCAUUACUGAGUU
hsa-miR-148a MIMAT0000243 Homo sapiens UCAGUGCACUACAGAACUUUGU
hsa-miR-122 MIMAT0000421 Homo sapiens UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG
dre-miR-737 MIMAT0003768 Danio rerio AAUCAAAACCUAAAGAAAAUA
hsa-miR-21 MIMAT0000076 Homo sapiens UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA
hsa-miR-194 MIMAT0000460 Homo sapiens UGUAACAGCAACUCCAUGUGGA
hsa-miR-150 MIMAT0000451 Homo sapiens UCUCCCAACCCUUGUACCAGUG
hsa-miR-491-5p MIMAT0002807 Homo sapiens AGUGGGGAACCCUUCCAUGAGG
hsa-miR-15b MIMAT0000417 Homo sapiens UAGCAGCACAUCAUGGUUUACA
hsa-miR-29b MIMAT0000100 Homo sapiens UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU
hsa-miR-30a MIMAT0000087 Homo sapiens UGUAAACAUCCUCGACUGGAAG
hsa-miR-29c MIMAT0000681 Homo sapiens UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA
hsa-miR-195 MIMAT0000461 Homo sapiens UAGCAGCACAGAAAUAUUGGC
hsa-miR-7 MIMAT0000252 Homo sapiens UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU
hsa-miR-886-5p MIMAT0004905 Homo sapiens CGGGUCGGAGUUAGCUCAAGCGG
hsa-miR-182 MIMAT0000259 Homo sapiens UUUGGCAAUGGUAGAACUCACACU
hsa-miR-497 MIMAT0002820 Homo sapiens CAGCAGCACACUGUGGUUUGU
hsa-miR-375 MIMAT0000728 Homo sapiens UUUGUUCGUUCGGCUCGCGUGA
hsa-miR-26b MIMAT0000083 Homo sapiens UUCAAGUAAUUCAGGAUAGGU
hsa-miR-128 MIMAT0000424 Homo sapiens UCACAGUGAACCGGUCUCUUU
hsa-miR-200b MIMAT0000318 Homo sapiens UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA
hsa-miR-320a MIMAT0000510 Homo sapiens AAAAGCUGGGUUGAGAGGGCGA
hsa-miR-196b MIMAT0001080 Homo sapiens UAGGUAGUUUCCUGUUGUUGGG
mmu-miR-19b MIMAT0000513 Mus musculus UGUGCAAAUCCAUGCAAAACUGA
hsa-let-7c MIMAT0000064 Homo sapiens UGAGGUAGUAGGUUGUAUGGUU
hsa-miR-9 MIMAT0000441 Homo sapiens UCUUUGGUUAUCUAGCUGUAUGA
hsa-miR-373 MIMAT0000726 Homo sapiens GAAGUGCUUCGAUUUUGGGGUGU
hsa-miR-338-3p MIMAT0000763 Homo sapiens UCCAGCAUCAGUGAUUUUGUUG
hsa-miR-98 MIMAT0000096 Homo sapiens UGAGGUAGUAAGUUGUAUUGUU
hsa-miR-214 MIMAT0000271 Homo sapiens ACAGCAGGCACAGACAGGCAGU
dre-miR-16a MIMAT0001774 Danio rerio UAGCAGCACGUAAAUAUUGGUG
bta-miR-139 MIMAT0003788 Bos taurus UCUACAGUGCACGUGUCUCCAGU
bta-miR-30d MIMAT0003533 Bos taurus UGUAAACAUCCCCGACUGGAAGCU
hsa-miR-26a MIMAT0000082 Homo sapiens UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU
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